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磷酸化修飾

        磷酸肽在生命過程中發(fā)揮重要作用,磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser,Thr,。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸,目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法,但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點,特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長的多肽的時候,連接效率低,最后產品純度很低,對于這種磷酸化多肽,我們考慮采用后磷酸化方法,其合成過程就是在多肽合成結束后,選擇性脫去要標記的氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應,而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。
       后磷酸化,采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,隨后在過氧酸下氧化生成磷酰基,完成反應。


目前,多肽的磷酸化修飾方法主要有兩種:
(1)將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中;
(2)多肽序列在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化。
 
1)將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中:
即事先將需要磷酸化的氨基酸(Thr,Ser或Tyr)磷酸化并適當保護,然后按照正常SPPS 合成流程將磷酸化單體縮合到多肽指定位點。這種方法操作簡便,已經(jīng)成為多肽單位點 磷酸化修飾的主要方法。




2)多肽序列在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化:
        采用將磷酸化單體縮合到多肽中的方法進行磷酸化修飾時,磷酸化的氨基酸由于側鏈修 飾的較大基團產生的位阻而導致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會比較困難, 尤其在含有多個磷酸化位點修飾時,合成將變得異常困難,并且最終產物成分復雜,難 以分離,產率極低。
        
因此,當肽鏈中多個位點進行磷酸化時,可以考慮采用將多肽序列 在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化:其合成過程主要 就是在多肽合成結束之后,選擇性的脫去要標記氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可 以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應。
        側鏈保護基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫 除。采用這種方法時,可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體, 連接到羥基上,然后在過氧酸條件下氧化生成磷?;瓿煞磻?。


 

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